Principios de análisis instrumental

788 Capítulo 30 Electroforesis capilar, electrocromatografía capilar y fraccionamiento por flujo y campo <« les y nitroderivados aromáticos de masa molecular baja con un equipo similar al que se muestra en la figura 30.1. La cromatografía micelar e/ectrocinética es un tipo de electroforesis capilar que ofrece varias características únicas. 16 Al igual que la electroforesis capilar, logra separaciones muy efectivas con microvolúmenes de disolu– ciones de muestra sin la necesidad del sistema de bombeo de alta presión que requiere la cromatografía de líquidos de alta resolu– ción. Sin embargo, a diferencia de la electroforesis capilar normal, la cromatografía micelar electrocinética (MEKC, por sus siglas en inglés) ayuda a separar especies sin carga y con carga. En la MEKC, una fase móvil es transportada por una fase estacionaria mediante flujo electroosmótico. Como se puede ver en la figura 30.2, el bom– beo electroosmótico causa un perfil plano en lugar del perfil para– bólico del flujo inducido por presión. El perfil plano del bombeo osmótico ocasiona bandas estrechas y, por tanto, altas eficiencias de separación. 16 Para una breve revisión véase S. Terabe, Anal. Chem., 2004, 76, p. 240A, DOI: 10.1021/ac0415859. 500 400 1- pi 10.1 e •o ·¡¡ 300 ~ 1- ..0 "' Las micelas se forman en disolución acuosa cuando la con– centración de una sustancia iónica que tiene una cola de una larga cadena de hidrocarburos se incrementa por encima de cierto valor denominado concentración micelar crítica (CMC). En este momento, el tensoactivo empieza a formar aglomerados esféricos, de entre 40 y 100 iones, cuyas colas de hidrocarburos se orien– tan hacia el interior del cúmulo y los extremos cargados quedan expuestos al agua en el exterior. Las micelas constituyen una segunda fase estable que es capaz de alojar compuestos no polares en el interior hidrocarbonado de las partículas y, por tanto, solubi– liza compuestos no polares. La solubilización se produce cuando se lava un material o una superficie grasa con una disolución detergente. En la cromatografía micelar electrocinética, los tensoactivos se añaden a la disolución amortiguadora de operación en canti– dades que superen el valor de la concentración micelar crítica. Hasta la fecha, en la mayoría de las aplicaciones, el tensoactivo que se utiliza es el dodecil sulfato de sodio (SDS, por sus siglas en inglés) . La superficie de una micela iónica de este tipo posee 7.5 .: 6.4 3.9 : 5.3 !· " 200 "O 1- 8.5 '¡ o; IC " (/1 100 o 500 400 ,g ·¡¡ 300 ~ ..0 "' " 200 "O o; IC " (/1 100 o 1- l - 1- 1 o 10 j_ 20 Tiempo, min a) ~ 1 30 ~-~~-0- pi 10.1 1- Ribonucleasa 1- Citocromo e ~ 1- 1- L 1- 1 o 10 7.5 3.9 6.4 Albúmina 5.3 8.5 '---' " r-..-..1 1 20 Tiempo, min b) 1 30 40 . ~· .:. 40 FIGURA 30.13 Enfoque isoeléctrico capilar de proteínas. Los puntos isoeléctricos, pi, aparecen arriba de cada uno de los picos. En a), se mues– tra un grupo de marcadores de baja masa molecular de pi co noci do. En b), las proteínas ribonucleasa, citocromo e y albúmina se muestran junto con los marcadores. La detección se efectuó por absorción UV. (Tomada de M. Horká, F. Rüzicka, J. Horky, V. Holá y K. Slais, J. Chromatogr. 8, 2006, 841, p. 152, 001: 10.1016/j.jchromb.2006.05.013. Con autoriza ción.)