Principios de análisis instrumental

2 5 I 0.004 AU 3 4 A 11 o 5 7 l 1 10 Tiempo, min a) 1 1 Jl 15 o 5 >» 30( Aplicaciones de la electroforesis capilar 789 4 5 JO JI J 2 3 78 ¡: 1 6 9 '--- J J J 10 15 20 Tiempo, min b) FIGURA 30.14 Separación típica mediante cromatografía micelar electrocinética. a) Algunos compuestos de ensayo: 1 = metanol. 2 = resor– cinol. 3 = fenol. 4 = p-nitroanilina, 5 = nitrobenceno, 6 = tolueno, 7 = 2-naftol, 8 = Sudan III; capilar con diámetro interior de 50 ~m, 500 mm de longitud hasta el detector; voltaje aplicado - 15 kV; detección: absorción UVa 210 nm. b) Análisis de un antigripal: 1 = acetaminofén, 2 = cafeína, 3 = sulpirina, 4 = naproxeno, 5 = guaifenesina, 10 = noscapina, 11 = clorofeniramina y tipepidina; voltaje aplicado: 20 kV; capilar de las mismas características que en a); detección: absorción UVa 220 nm. (Tomada de S. Terabe, Trends Anal. Chem., 1989, 8, p. 129, DOI: 10.1016/0165-9936(89)85022-8. Con autorización.) una elevada carga negativa, lo cual le proporciona una alta movi– lidad electroforética. Sin embargo, la mayoría de las disoluciones amortiguadoras presenta una velocidad de flujo electroosmó– tico hacia el electrodo negativo tan alta que hace que las micelas aniónicas también se desplacen hacia ese electrodo, pero a una velocidad muy reducida. Entonces, en la práctica, la mezcla de disoluciones amortiguadoras está formada por una fase acuosa que se desplaza rápidamente y la fase micelar que se mueve más despacio. Cuando una muestra se introduce en este sistema, los componentes se distribuyen entre la fase acuosa y la fase hidro– carbonada en el interior de las micelas. Las posiciones resultan– tes de estos equilibrios dependen de la polaridad de los solutos. Si éstos son polares, se favorece la fase acuosa; si los compuestos son no polares, el entorno preferido es el hidrocarbonado. Los fenómenos apenas descritos son muy similares a lo que ocurre en una columna cromatográfica de líquidos, excepto que la "fase estacionaria" se desplaza a lo largo de la columna, pero a una velocidad mucho más lenta que la fase móvil. El mecanismo para la separación es idéntico en ambos casos y depende de las diferencias en las constantes de distribución de los analitos entre la fase móvil acuosa y la fase pseudoestacionaria hidrocarbonada. Por consiguiente, el proceso que tiene lugar es una verdadera cromato– grafía, y de ahí el nombre de ''cromatografía micelar electrocinética". La figura 30.14 muestra dos separaciones típicas por medio de esta técnica. La cromatografía micelar electrocinética se ha vuelto impor– tante en las separaciones quirales. 17 En este caso, los agentes de 17 R. Vaspalec y P. Bocek, Chem. Rev., 2000, 100, p. 3715, DO!: 10.1021/cr941!583. resolución quiral se usan como en la cromatografía de líquidos de alta resolución para complejar de preferencia uno de los isó– meros. Se usa un agente de resolución quiral con propiedades de detergente, como el ácido biliar, para formar las micelas o bien, se añade un agente de resolución, como la ciclodextrina, a un deter– gente que es aquiral. En muchos aspectos, las separaciones qui– rales son más fáciles de efectuar mediante cromatografía micelar electrocinética que por medio de cromatografía de líquidos, aun– que ésta todavía es la técnica predominante en la industria porque casi todos la conocen. La cromatografía micelar electrocinética parece tener un futuro prometedor. Una ventaja de esta técnica híbrida sobre la cromatografía de líquidos de alta resolución es que la efectividad de la columna es mucho más elevada (lOO 000 platos o más). Ade– más, cambiar la segunda fase en la cromatografía micelar electro– cinética es sencillo, ya que solo es necesario variar la composición de la micela en la disolución amortiguadora. En cambio, en la HPLC, la segunda fase solo se puede modificar si se cambia el tipo de relleno de la columna. Al parecer, la técnica de cromatografía micelar electrocinética es en particular útil para aislar moléculas pequeñas que es imposible separar mediante electroforesis zonal en gel. Entre los adelantos recientes está la preconcentración en línea para aumentar la sensibilidad y la detección mediante espec– trometría de masas. 18 La detección por espectrometría de masas es posible también , aunque los surfactantes pueden provocar difi– cultades, particularmente cuando se utiliza ionización por elec– tronebulización. 18 S. Terabe, Anal. Chem. , 2004, 76, p. 240A.