Principios de análisis instrumental

_ _, o 5 .1 o 2 10 \ 15 Tiempo, min a) \. 4 Tiempo, min b) e ""' i ', ' j \ 20 25 30 ••• :'' :¡; 6 8 10 FIGURA 29.5 Separación de enantiómeros de metoprolol mediante HPLC a) y cromatografía de fluidos supercríticos b) en una fase esta– cionaria de Chiralcel OD. En a) la fase móvil era 20% de 2-propanol en hexano con dietilamina a 1%; selectividad a = 2.67 y resolución R, = 4.8. En b), el C0 2 que se usó contenía metanol a 20% e isopropi– lamina a 0.5%; a = 2.77 y R, = 12.7. (De K. W. Phinney, Anal. Chem., 2000, 72, p. 204A, OOI: 10.1021/ac0027542; adaptada de M. S. Villeneuve y R. J. Anderegg, J. Chromatogr. A, 1998, 826, p. 217, OOI: 10.1016/S0021-9673(98)00696-7.) piar columnas con diferentes fases estacionarias. Las separaciones quirates de preparación mediante cromatografía de fluidos super– críticos llaman mucho la atención porque la fase móvil se puede eliminar con facilidad simplemente ventilando el C0 2 • La cromatografía de fluidos supercríticos también es muy útil en las separaciones quirales. En las figuras 29.6, 29.7 y 29.8 se ilustran tres aplicaciones características de esta técnica. La figura 29.6 muestra la separación de una serie de oligómeros del dimetil– polisiloxano cuyas masas moleculares están comprendidas entre 400 y 700 Da. Este cromatograma se obtuvo con una columna capilar de sílice fundida de 10m X 100 11m de diámetro interno y revestida con una película de fenil polisiloxano a 5% de 0.25 11m de espesor. La fase móvil fue C0 2 a 140 oc y se utilizó la siguiente programación de presión: 80 atmósferas durante 20 minutos, seguido de un gradiente lineal de 80 a 280 atmósferas a razón de 5 atm/min. Se utilizó un detector de ionización por flama. En la figura 29.7 pueden observarse los cromatogramas obtenidos para nueve fármacos diferentes al utilizar una croma– tografía de fluidos supercríticos de columna empaquetada y un }}} 29B Cromatograña de fluidos supercríticos 769 80 80 180 280 Presión, atm o 20 40 60 Tiempo, min FIGURA 29.6 Separación de los oligómeros de dimetilpolisiloxano mediante cromatografía de fluido s supercríticos. (Tomada de C. M. White y R. K. Houck, HRC&CC. 1986, 9, p. 4, 001: 10.1002/ jhrc.1240090103. Con autorización.) gradiente de elución. Se muestran seis diferentes fases estacio– narias. Se puede observar que la fase estacionaria afecta la reten– ción de los analitos y el orden de elución. Los compuestos ácidos (1, 2, 3 y 4) eluyen más rápidamente en sílica a) y sílica híbrida b) . Los compuestos neutros (5 y 6) no eluyeron en la fase estacionaria compuesta por una amida f) . Los compuestos básicos (7, 8 y 9) no eluyeron en sílica, pero eluyeron en la fase de 2-EP d). Varias de las bases mostraron ensanchamiento de banda y una deformación posterior del pico significativa (b, e y d). La figura 29.8 ilustra la determinación de triglicéridos en aceite vegetal por CFS de baja presión y alta eficiencia, utilizando "partículas superficialmente porosas': Estas partículas están hechas de sílica no porosa rodeada por una capa porosa con propiedades similares a las de los materiales porosos que se utilizan en HPLC. Los triglicéridos son cadenas de tres ácidos grasos enlazadas a un esqueleto de glicerol. Note como incrementa la retención al cambiar de acetonitrilo al 10% a acetonitrilo al 30% como modificador. Esto se atribuye a una disminución en la solubilidad de los triglicéridos cuando la proporción de modificador polar fue aumentada. El largo de la columna también se incrementó utilizando cuatro columnas en serie en vez de las tres columnas utilizadas en la figura 29.8. Se encontró que los triglicéridos eran muy solubles en la fase móvil