Principios de análisis instrumental

Los factores de retención deducidos de este modo se pueden usar para perfeccionar métodos para la cromatografía en columna como se menciona en la sección 28D.2. Por otra parte, la obten– ción de factores de retención por cromatografía en capa fina es más sencillo y rápido que a partir de los datos obtenidos en expe– rimentos en una columna. Altura del plato La altura de plato aproximada también se puede determinar para un tipo determinado de relleno por cromatografía en capa fina. Por consiguiente, para la muestra 2 de la figura 28.29a, el número de platos teóricos se obtiene mediante la ecuación (28.17) donde dR y W se definen en la figura. La altura de plato es entonces H = dR!N (28.18) 281.4 Aplicaciones de La cromatografia en capa fina El método de capa fina se puede aplicar tanto en la identificación cualitativa de compuestos como en el análisis cuantitativo. Cromatografía en capa fina cualitativa Por lo general, los datos de un solo cromatograma no proporcio– nan la información suficiente para identificar las distintas especies presentes en una mezcla, debido a la variabilidad de los valores de Rr respecto al tamaño de la muestra, la placa de capa fina y las condiciones existentes durante el desarrollo. Además, siempre existe la posibilidad de que dos solutos muy diferentes puedan presentar valores de RF idénticos o casi idénticos en ciertas condi– ciones determinadas. Métodos de identificación. A veces se puede lograr una iden– tificación tentativa al aplicar a la placa disoluciones de especies purificadas que quizá se podrían encontrar en el analito. La coin– cidencia entre los valores de Rr proporciona una gran evidencia para la identificación de uno de los componentes. En otros casos, la identidad de especies separadas se confirma mediante la técnica de raspado y disolución. En esta técnica, la zona que contiene el analito se raspa en la placa mediante una hoja de rasurar o con una espátula y se colectan las raspaduras en un trozo de papel encerado. Después de depositarlas en un recipiente adecuado, el analito se disuelve con un disolvente apropiado y se separa de la fase estacionaria mediante centrifugación o filtración. Las técni– cas espectroscópicas, como la espectroscopia de fluorescencia, de absorción UV-visible, de resonancia magnética nuclear o de IR de transformada de Fourier se aplican para identificar las espe– cies. La cromatografía en capa fina también se acopla ahora en línea a varias técnicas de detección espectrométricas. El acopla– miento de la cromatografía en capa fina con los espectrómetros de masas es un campo activo de investigación. 41 "P. Bernard-Savary y C. F. Poole,]. Chmmatogr. A, 2015, 1421, 184, DO!: 10.1016/j. chroma.2015.08.002. >» 28I Cromatografía en capa fina 759 r 10 9 q:: 7 ~ 8 ¡j 6 > ~ o 5 4 Punto de 3 aplicación X de la muestra 2 ----Disolvente B ---~ FIGURA 28.30 Cromatograma en capa fina bidimensional (gel de sílice) de algunos aminoácidos. Disolvente A: tolueno, 2-cloroetanol, piridina. Disolvente 8: cloroformo, alcohol bencílico, ácido acético. Aminoácidos: 1) ácido aspártico, 2) ácido glutámico, 3) serina, 4) {3-alanina, 5) glicina, 6) alanina, 7) metionina, 8) valina, 9) isoleucina y 10) cisteína. Cromatografía plana en dos dimensiones. La figura 28.30 ilustra la separación de aminoácidos de una mezcla mediante el desarrollo en dos dimensiones. La muestra se coloca en una de las esquinas de una placa cuadrada y se realiza el desarrollo en dirección ascendente con el disolvente A. En seguida se elimina éste por evaporación, se gira la placa 90° y se realiza ahora el desarrollo ascendente con el disolvente B. Tras la eliminación del disolvente se determinan las posiciones de los aminoácidos des– pués de rociar la placa con ninhidrina, reactivo que forma con los aminoácidos un producto de color rosa a púrpura. Las manchas originadas se identifican al comparar sus posiciones con las de los patrones. Las técnicas para obtención de imágenes se utilizan en el análisis cuantitativo de separaciones bidimensionales. 42 Análisis cuantitativo Se obtiene un cálculo semicuantitativo de la cantidad de compo– nente presente al comparar el área de la mancha con la del patrón. Los mejores resultados se obtienen si se raspa la mancha de la placa, se extrae el analito del sólido que forma la fase estacionaria y se determina el analito mediante algún método físico o químico apropiado. Un tercer procedimiento consiste en usar un densitó– metro de barrido que puede medir la fluorescencia o la absorción de la mancha. "'M. Medic-Saric el al., f. Planar. Chromatogr.-Mod. TLC, 2004, 17, 459, DOI: 10.1556/)PC.17.2004.6.12.