Principios de análisis instrumental

758 Capítulo 28 Cromatografía de líquidos de alta resolución <« Cubierta / Desarrollador Mecha \ = s;o;=;;= ====o=;;;"""'/ a) b) FIGURA 28.28 a) Cámara para flujo ascendente. b) Cámara para produ– cir el flujo horizontal. en este caso Las muestras se colocan en ambos extremos de La Lámina y se desplazan hacia La parte media , por Lo que se duplica el número de muestras que se pueden acomodar. Otro método de detección se basa en la incorporación de un material fluorescente a la fase estacionaria. Una vez que ha fina– lizado el desarrollo, se examina la placa con luz ultravioleta. Los componentes de la muestra amortiguan la fluorescencia del mate– rial de tal forma que toda la placa exhibe fluorescencia, excepto los lugares donde se encuentran los componentes de la muestra que no son fluorescentes. La figura 28.29 muestra un esquema ideal de una placa tras el desarrollo y el cromatog rama correspondiente. La muestra 1 estaba constituida por dos componentes y la 2 contenía solo uno. En muchas ocasiones las manchas reales sobre una placa presen– tan colas, lo que origina sefiales que no son tan simétricas como las de la figura. 281.3 Características de rendimiento de Las placas de capa fina La mayoría de los términos y ecuaciones desarrollados para la cromatografía en columna de la sección 26B se puede aplicar tam– bién, con ligeras modificaciones, a la cromatografía en capa fina. Se requiere un nuevo término, el factor de retención o Rr- Factor de retención La placa de capa fina creada para un solo soluto se muestra en la figura 28.29a para la muestra 2. El factor de retención para este soluto es dR RF = - . dM (28.12) donde dR y dM son distancias lineales medidas desde la línea de aplicación. Los valores de RF tienen la capacidad de variar desde 1 para los solutos que no se retrasan hasta valores que se aproximan a O. Tenga en cuenta que, si las manchas no son simétricas, como las de la figura 28.29a, la medida de dR se basa en la posición de intensidad máxima. Factor de retención Todas las ecuaciones de la tabla 26.5 se adaptan a la cromatogra– fía en capa fina. A fin de poder aplicar estas ecuaciones, solo se necesita relacionar dR y dM como se definen en la figura 28.29a con tR y tM, los cuales se definen en la figura 26.4. Para establecer estas relaciones, considere el soluto único que aparece en la mues– tra 2 de la figura 28.29a. En este caso, tM y tR corresponden a los Muestra 2 Muestra 1 de origen a) Oí '" " U) b) C<l,_____cfM-----+ 1 1 ' [--dR~ 1 1 1 1 [-<--dZ-J 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Dislancia de migración, cm Frente del disolvente V FIGURA 28.29 a) Placa de capa fina después de desarrollarse. b) Cromatograma de capa fina para La muestra 1. tiempos necesarios para que la fase móvil y el soluto recorran una distancia determinada, en este caso, dR. Para una fase móvil, este tiempo es igual a la distancia que recorre dividida entre la veloci– dad lineal u, es decir (28.13) Sin embargo, el soluto no alcanza este mismo punto hasta que la fase móvil no ha recorrido la distancia dM. Por tanto, (28.14) Al sustituir las ecuaciones 28.13 y 28.14 en la ecuación 26.12 se obtiene dM- dR k = (28.15) dR El factor de retención k también se puede expresar en función del factor de retención al reescribir la ecuación 28.15 en la forma (28.16)