Principios de análisis instrumental

es la masa molecular máxima de una especie que podrá penetrar en los poros. Todas las especies cuya masa molecular es mayor que el límite de exclusión, son tan grandes que no quedan rete– nidas, por lo que son arrastradas juntas para dar el pico A en el cromatograma que se muestra en la figura 28.26b. Por debajo del límite de penetración, las moléculas de soluto pueden penetrar por completo en los poros. Por debajo de esta masa molecular todas las moléculas del soluto son tan pequeñas que son arrastradas y dan una sola banda, la marcada con D. A medida que las masas molecu– lares disminuyen respecto al límite de exclusión, las moléculas del soluto pasan cada vez más y más tiempo, en promedio, en los poros que forman las partículas y, por consiguiente, se mueven progresi– vamente con mayor lentitud. Es en la región de penetración selec– tiva donde tiene lugar el fraccionamiento o división, lo que da lugar a picos de soluto individuales como los B y C del cromatograma. Las curvas de calibración experimentales, semejantes en aspecto a la teórica de la figura 28.26a, se obtienen por lo regular ~ Simulación: Aprenda más acerca de la - ·-- cromatografía de exclusión por tamaño en www.tinyurl.com/skoogpia7* 'Este material se encuentra disponible en inglés. 1 ' ))) 28G Cromatografía de exclusión por tamaño 755 mediante patrones. En muchas ocasiones los propios fabricantes de las columnas de exclusión por tamaño suministran dichas cur– vas. Los patrones de calibración de masa molecular deben ser tan parecidos como sea posible a los componentes de la muestra en cuanto a funcionalidad química. 28G.3 Aplicaciones de la cromatografia de exclusión por tamaño Los métodos de filtración sobre gel y de penetración sobre gel son complementarios porque el primero se aplica a las muestras solu– bles en agua y la segunda se utiliza para sustancias disueltas en disolventes orgánicos menos polares. Una de las aplicaciones úti– les del procedimiento de exclusión por tamaño es la separación de las moléculas de elevada masa molecular, de productos naturales de las especies de baja masa molecular y de las sales. Por ejemplo, un gel con un límite de exclusión de varios miles puede separar con claridad las proteínas de los aminoácidos y de los péptidos de baja masa molecular. Otra aplicación útil de la cromatografía de penetración en gel es la separación de homólogos y oligómeros. Estas aplicacio– nes se ilustran en los ejemplos que se muestran en la figura 28.27. El primero muestra la separación de una serie de ácidos grasos a) ¡.____V--..:,~---- V,· ------+i 1 o 1 b) ~ 10 7 : 10 6 Límite de exclusión 1 1 1 1 1 ~ 105 Región de penetración selectiva u O) o E Cromatograma FIGURA 28.26 a) Curva de calibración para una columna de exclusión por tamaño. b) Cromatograma en el que se muestra el pico A que contiene todos los compuestos con masas moleculares mayores que el límite de exclusión, los picos By C que consisten en los compuestos dentro de la región de penetración selectiva y el pico D que contiene todos los compuestos menores que el límite de penetración.