Principios de análisis instrumental

derivados precolumna con ortoftalaldehído. Los isoindoles sus– tituidos25 que se forman en la reacción manifiestan una intensa fluorescencia a 425 nm, lo que permite la detección al nivel de unos pocos picomoles (10 - 12 moles). Por otra parte, la polaridad de los derivados es tal que es posible la separación con rellenos de C 18 en fase inversa. Las ventajas de este procedimiento reciente son la rapidez y el menor consumo de muestra. Los derivados se usan con frecuencia con detectores selectivos como los de fluores– cencia, electroquímicos y espectrómetricos de masa. Cromatografía de par iónico La cromatografía de par iónico/ 6 a veces llamada también croma– tografía por apareamiento de iones, es un subconjunto de la cro– matografía en fase inversa en la cual especies que se ionizan con facilidad se separan en columnas de fase inversa. En este tipo de cromatografía, una sal orgánica que contiene un contraión orgá– nico grande, como un ion amonio cuaternario o sulfonato de alquilo se aftade a la fase móvil como un reactivo para formar parejas de iones. Se proponen dos mecanismos de separación. " En cuanto a la estructura de estos compuestos, véase S. S. Simons Jr. y D. E. )ohn– son,]. Amer. Chem. Soc., 1976, 98, 7098. DOI: l0.102llja00438a070. 26 Véase T. Cecchi, Ion-Pair Chromatography and Related Techniques, Boca Raton, FL: CRC Press, 2010. 2 2.4 o 5 10 15 20 o 5 »> 280 Cromatografía de partición 747 En el primero, el contraión forma un par iónico sin carga con un ion del soluto de carga opuesta en la fase móvil. Después, este par iónico se divide en la fase estacionaria no polar, lo que da una retención diferencial de los solutos con base en la afinidad del par de iones de las dos fases. Otra posibilidad es que el contraión sea retenido fuertemente por la fase estacionaria normalmente neu– tral y le imparta una carga. La separación de los iones de soluto orgánico de carga opuesta ocurre luego por la formación de com– plejos reversibles de pares iónicos con los solutos retenidos con más firmeza que forman los complejos más fuertes con la fase estacionaria. Algunas separaciones únicas de compuestos tanto iónicos como no iónicos en la misma muestra pueden lograrse mediante esta forma de cromatografía de partición. En la figura 28.20 se ilustra la separación de compuestos iónicos y no iónicos mediante sulfonatos de alquilo de varias longitudes de cadena como agentes que forman parejas de iones. Tome en cuenta que una mezcla de sulfonatos de alquilo C 5 y C 7 proporciona los mejores resultados en la separación. A menudo, las aplicaciones de la cromatografía de pares iónicos se superponen con las de la cromatografía de intercam– bio iónico, que se trata en la sección 28F. Por lo que toca a la separación de iones inorgánicos y orgánicos pequeftos, se prefiere la cromatografía de intercambio de iones a menos que haya un problema de selectividad. 2 10 o 5 10 Tiempo, min Tiempo, min Tiempo, min Columna: ¡.¡-Bondapak C 18 (4mm X 30 cm) Disolvente: MeOH/H 2 0 con sulfonato de alquilo e, a) Columna: ¡.¡-Bondapak C 18 Columna: ¡.¡-Bondapak C 18 (4 mm X 30 cm) (4 mm X 30 cm) Di solvente: MeOHIH 2 0 con Disolvente: MeOH/H 2 0 con una mezcla sulfonato de alquilo C 5 (50/50) de sulfonatos de alquilo e, ye, ~ ~ FIGURA 28.20 Cromatogramas que ilustran la separación de mezclas de compuestos iónicos y no iónicos mediante cromatografía de pares iónicos. Compuestos: 1) niacinamida, 2) piridoxina, 3) riboflavina, 4) tiamina . Aun pH de 3.5, la niacinamida está fuertemente ionizada, y la riboflavina es no iónica. La piridoxina y la tiamina están débilmente ionizadas. Columna: ¡J-Bondapak, ( 18 , 4 mm x 30 cm. Fase móvil: a) MeOH y H 2 0 con sulfonato de alquilo ( 7 ; b) MeOH y H 2 0 con sulfonato de alquilo C 5 ; e) MeOH y H 2 0 con una mezcla 1:1 de sulfonatos de alquilo C 5 y C 7 • (Cortesía de Waters Associates, Inc.)