Principios de análisis instrumental

MeOH 1 (66.6, j ~2. j 6.2) 8 4 (50, so. 0) 7 • (50, O, 50)e 6 (33.3, 33.3, 33.3) 9 10 X X (16.2, 66.6, 16.2) (16.2, 16.2, 66.6) J ___________ ~(0~, 5:t0~,5~0~) ____________ 4 , 2 ~ · ~ M~N 5 T~ FIGURA 28.17 Triángulo de selectividad de disolventes para mejorar Las separaciones en fase inversa. Diez mezclas de los tres disolventes orgánicos, metanol, acetonitrilo y tetrahidrofurano, se muestran con Las proporciones relativas entre paréntesis (MeOH, MeCN y THF). El agua se usa para mantener la potencia del disolvente y el valor de k dentro del intervalo de valores apropiados. mas muestran los resultados de los experimentos iniciales para determinar el valor mínimo de k que se requería. En este caso, el último componente de elución se utiliza para determinar k. Con un k del componente 6 igual a 10 existe espacio suficiente en la escala de tiempo para los distintos picos; sin embargo, en estas condiciones el valor de a para los componentes 1 y 3 (y en menor grado para los 5 y 6) no son suficientemente grandes como para obtener una resolución satisfactoria. Con el objetivo de encontrar mejores valores de a se realizaron más experimentos; en todos los casos se ajustó la proporción de agua para obtener un k= 10 para el último componente en eluir. En las figuras 28.16c y d se mues– tran los resultados que se obtuvieron en los experimentos con las mezclas metanol-agua y tetrahidrofurano-agua. Se ejecutaron más experimentos variando en forma sistemática los pares de tres disolventes orgánicos (en cada caso k se ajustaba a 10 mediante el agua). Para finalizar, se eligió la mezcla que se muestra en la figura 28.16e como la mejor fase móvil para la separación del grupo par– ticular de compuestos. En separaciones en fase normal se utiliza un triángulo de disolventes similar, en el cual los disolventes para el control de la selectividad son etiléter, cloruro de metileno y cloroformo; 23 para el ajuste de la fuerza del disolvente se utiliza n-hexano. Con estos sistemas de disolventes es posible conseguir una mejora con un número mínimo de ensayos. 280.3 Aplicaciones de La cromatografia de partición Cuando se usan rellenos unidos químicamente en fase inversa junto con disolventes muy polares (a menudo acuosos) se aproxi– man al sistema ideal y universal para la cromatografía de líquidos. Debido a su amplia aplicabilidad, su conveniencia y la facilidad 23 Tome en cuenta que los disolventes dorados están sujetos a regulaciones ambien– tales rigurosas. ))} 28D Cromatografía de partición 745 TABLA 28.3 Aplicaciones características de la cromatografía de partición . .. Campo Mezclas típicas Farmacéuticos Bioquímicos Productos alimenticios Químicos industriales Contaminantes Antibióticos, sedantes, esteroides, analgésicos Aminoácidos, proteínas, tar:bohidratos, lípidos Endulzantes artificiales, antioxidantes, aflatoxinas, aditivos Aromáticos condensados, surfactantes, propulsantes, colorantes Pesticidas, herbicidas, fenoles, bifenilos policlorados Ciencia forense Fármacos, venenos, alcohol en sangre, ·narcóticos Química clínica Ácidos biliares, metabolitos de fármacos, extractos de orina, estrógenos con que pueden modificarse k y a al variar las fases móviles acuo– sas, estos rellenos se aplican con frecuencia antes que todos los otros en el caso de separaciones de exploración con nuevos tipos de muestras. En la tabla 28.3 se enumeran algunos ejemplos caracterís– ticos de la gran variedad de aplicaciones de la cromatografía de partición en diversos campos. Se tiene una idea más completa de la diversidad de aplicaciones de esta técnica si se consultan los últimos artículos y libros. 24 En la figura 28.18 se ilustran dos de las miles de aplicaciones de la cromatografía de partición con fase enlazada químicamente al análisis de materiales para el consumo y la industria. Formación de derivados A veces, es útil convertir los componentes de una muestra a un derivado antes o a veces después de la separación cromatográfica. Tal tratamiento puede ser deseable 1) para reducir la polaridad de la especie y poder utilizar la división de columnas más que de la adsorción o intercambio de iones; 2) aumentar la respuesta del detector y así la sensibilidad, para todos los componentes de la muestra, y 3) mejorar selectivamente la respuesta del detector a ciertos componentes de la muestra. En la figura 28.19 se ilustra el uso de derivados para reducir la polaridad y aumentar la sensibilidad. La muestra está consti– tuida por 30 aminoácidos de interés fisiológico. Con frecuencia, dicha separación se realizaba con una columna de intercambio iónico y con detección fotométrica basada en una reacción posco– lumna de los aminoácidos con un reactivo colorimétrico como la ninhidrina. El cromatograma que se muestra en la figura 28.19 se obtuvo mediante un procedimiento automático de formación de 24 Para ejemplo, véase L. R. Snyder, Anal. Chem., 2000, 72, 412A, DO!: 10.1021/ ac002846r; ). G. Dorsey et al. , Anal. Chem. , 1998, 70, 591R, DO!: 10.1021 / a1980022h; HPLC: Practica/ and Industrial Applications, J. K. Swadesh, ed., 2a. ed., Boca Raton, FL: CRC Press, 2001; Handbook ofPharmaceutical Analysis by HPLC, S. Ahuja y M. W. Dong, eds., San Diego, CA: Elsevier, 2005.