Principios de análisis instrumental

744 Capítulo 28 Cromatografía de líquidos de alta resolución <« 2 3 1 o 1,2,3 4 5 6 1 1 1 1 1 o 41 % CH 3 CN 59% H 2 0 k=5 1 1 1 1 1 1 1 5 10 Tiempo, min a) 49% CH 3 0H 51 % H 2 0 k = 10 5 4 6 1 1 1 5 1 1 1 15 2 3 5 1 1 1 1 1 o 5 o 1,3 30% CH 3 CN 70% H 2 0 k= 10 2 4 1 1 1 1 1 1 1 1 5 Tiempo, min b) 21 % THF 79% H 2 0 k= 10 6 4 1 1 1 1 1 2 11 % CH 3 CN 3 12% THF 77% H 2 0 k = 10 5 4 6 1 1 1 1 1 1 1 1 o 5 Tiempo, min Tiempo, min Tiempo, min e) d) e) FIGURA 28.16 Metodología sistemática para la separación de seis esteroides. En a) y en b) se muestra el uso de agua para ajustar k. Los efectos de la variación de a a k consta nte se muestran en b), e), d) y e). Columna: 0.4 x 150 mm rellena con una fase inversa unida químicamente de C 8 co n partículas de 5 fim . Temperatura: 50 oc. Tasa de flujo: 3.0 cm 3 /min . Detector: UV 254 nm . THF = tetrahidrofurano. CH 3 CN = aceto nitrilo. Compuestos: 1) prednisona; 2) cortisona; 3) hidrocortisona; 4) dexametasona; 5) corticoste– rona; 6) cortoexolona. posiciones binarias de tres disolventes (agua más un modificador) definen los tres vértices del triángulo de disolventes, como se muestra en la figura 28.17. Por lo regular, son suficientes de siete a 10 experimentos para definir una composición de disolventes que produzca la mejor selectividad para un intervalo satisfactorio de k. Se usan varios esquemas de diseños estadísticos, como las factoriales completas, pero el enfoque del triángulo de disolven– tes requiere pocos experimentos. También existen ya programas de computación para ayudar a automatizar los esquemas para el mejoramiento de los disolventes. Además, se usan ampliamente programas para simulación, como el muy conocido DryLab, 22 para el desarrollo y optimización de los métodos. En la figura 28 . 16 se ilustra el enfoque sistemático del triángulo de disolventes en la separación de seis esteroides por cromatografía en fase inversa. Los dos primeros cromatogra- 22 DryLab es ahora parte del Molnár-Institute, http://molnar-institute.com/drylab/. Fue desarrollado por LC Resources, Inc., Walnut Creek, CA.