Principios de análisis instrumental

680 Capítulo 26 Introducción a las separaciones cromatográficas <« A+B Columna empacada a) b) Muestra 'o ,_ 'o B A 1¡ 1¡ Fase móvil FIGURA 26.1 a) Diagrama que muestra la separación de una mezcla de componentes Ay B por cromatografía de elución en columna. b) Señal de salida del detector en las distintas etapas de la elución que se muestran en a) . En la cromatografía moderna, la adición continua se consi– gue por medio de una bomba en la CL y en la CFS, o por la apli– cación de presión en la CG. Con la primera introducción de fase móvil nueva, el eluyente - la parte de la muestra contenida en la fase móvil- avanza hacia abajo por la columna, donde tiene lugar una distribución entre la fase móvil y la fase estacionaria (tiempo t 1 ). La interacción del soluto con fase móvil fresca y la fase esta– cionaria ocurre de manera simultánea a medida que la fase móvil lava la muestra a través de la columna. A medida que la fase móvil fresca fluye por la co lumna, transporta moléculas de soluto hacia abajo de la columna en una serie continua de transferencias entre las dos fases. Como el movi– miento de los solutos únicamente puede ocurrir en la fase móvil, la velocidad media a la que una zona de soluto migra hacia abajo ~ Simulación: Aprenda más acerca de la cromatografía _!Em __ de elución en www.ti nyurl.com/skoogpia7 * 'Este material se encuentra disponible en inglés. en la columna depende de la fracción de tiempo que permanece o reside en dicha fase. Esta fracción de tiempo es pequeña para las sustancias que son retenidas fuertemente por la fase estacio– naria -por ejemplo, el compuesto B en la figura 26.1- y grande cuando el soluto reside principalmente en la fase móvil (com– ponente A). De manera ideal, las diferencias de velocidad que resultan hacen que los componentes de la mezcla se separen en bandas, o zonas, que se localizan a lo largo de la columna (véase el tiempo t 2 en la figura 26.1) . El aislamiento de las especies sepa– radas se logra al pasar una cantidad suficiente de fase móvil por la columna hasta que las bandas individuales llegan al extremo, es decir, son eluidas o lavadas de la columna, en donde se detectan o se recogen (tiempos t 3 y t 4 en la figura 26.1). Dilución del analito La figura 26.1 ilustra una importante característica común del proceso cromatográfico: la dilución de los analitos siempre es parte de la separación cromatográfica. Por tanto, el tamaño de la