Principios de análisis instrumental

»> 15( Aplicaciones de los métodos fotoluminiscentes 371 TABLA 15.2 Selección de métodos fluorimétricos para especies inorgánicas e • , • ,. , , -·e- - ~-- e··· Lo~gitud d~-~nda: u'~ e ·.-·- ··-:· :---; ·;·-:· ~:e. -: ... - .- ---------- LOD, Ion Reactivo Absorción Fluorescencia . f.lg/mL e Interferencias . ~ ~ . - ·- - - . .. - AlH Granate de alizarina R 470 500 0.007 Be, Co, Cr, Cu, F- , NO;, Ni, PO/-, Th, Zr p- Supresor del complejo 470 500 0.001 Be, Co, Cr, Cu, Fe, Ni, de AP+de granate de PO/-, Th, Zr alizarina R B 4 0/- Benzoína 370 450 0.04 Be,Sb Cd 2 + 2-( o- Hidroxifenil) 365 Azul 2 NH 3 benzoxazol u+ 8-Hidroxiquinolina 370 580 0.2 Mg Sn4+ Flavanol 400 470 0.1 F-, PO/-, Zr Zn 2 + Benzoína Verde 10 B, Be, Sb, iones con color Tomado de ). A. Dean, Analytical Chemistry Handbook, New York: McGraw-Hill, 1995, pp. 5.60-5.62. En la tabla 15.2 se presenta una selección de reactivos fluo– rométricos y sus aplicaciones. Como se puede ver, los límites de detección o sensibilidad son muy bajos para la mayoría de estos métodos. 15C.2 Métodos para especies orgánicas y bioquimicas La cantidad de aplicaciones del análisis fluorométrico en la quí– mica orgánica es impresionante. Dean resumió las más impor– tantes en una tabla. 13 El título Fluorescence Spectroscopy of Sorne Organic Compounds comprende más de 200 sustancias, entre las que están compuestos tan diversos como adenina, ácido antraní– lico, hidrocarburos aromáticos policíclicos, cisteína, guanina, iso– niacida, naftoles, los gases que atacan el sistema nervioso sarín y tabún, proteínas, ácido salicílico, escatol, triptófano, ácido úrico y warfarina (coumadina). Se encuentran incluidos muchos agen– tes medicinales que se pueden determinar mediante fluorometría como adrenalina, morfina, penicilina, fenobarbital, procaína, reserpina y dietilamida del ácido lisérgico (LSD) . Sin duda, la aplicación más importante de la fluorometría es en el análisis de productos alimenticios, farmacéuticos, muestras clínicas y pro– ductos naturales. La sensibilidad y selectividad del método lo hacen particularmente valioso en estos campos. Una gran canti– dad de compuestos importantes desde el punto de vista fisiológico manifiestan fluorescencia. 15C.3 Métodos fosforimétricos Los métodos fo sforescentes y fluorescentes tienden a ser com– plementarios porque los compuestos fuertemente fluorescentes 13 ). A. Dean, Analytical Chemistry Handbook, pp. 5.63-5.69, New York: McGraw– Hill,1995. 14 Véase R.). Hurtubise, Phosphorimetry: Theory, lmtrumentation, and Applications, cap. 3, New York: VCH, 1990. manifiestan una débil fosforescencia y viceversa. 14 Por ejemplo, entre los hidrocarburos aromáticos con anillos condensados, aque– llos que contienen átomos pesados como halógenos o azufre, con frecuencia presentan una fuerte fosforescencia. Sin embargo, los mismos compuestos sin la presencia del átomo pesado, tienden a presentar fluorescencia en lugar de fosforescencia. La fosforimetría se utiliza para determinar una gran varie– dad de especies orgánicas y bioquímicas como ác idos nucleicos, aminoácidos, pirina y pirimidina, enzimas, hidrocarburos del petróleo y plaguicidas. Sin embargo, el método no ha alcanzado el uso tan difundido de la fluorometría, debido tal vez a que nece– sita bajas temperaturas y a la, casi siempre, poca precisión de las mediciones fosforescentes. Por otro lado, es atractiva la mayor selectividad posible de los procedimientos de fosforescencia. La razón de estas diferencias de comportamiento se debe a que la fosforescencia efectiva necesita el cruce rápido entre sistemas para poblar el estado triplete excitado, que a su vez reduce la concen– tración de moléculas en el singulete excitado y, por tanto, la inten– sidad de fosforescencia. Durante las últimas dos décadas, se ha hecho un esfuerzo considerable por perfeccionar los métodos fosforimétricos que puedan aplicarse a temperatura ambiente. 15 Las primeras observa– ciones de la fosforescencia a temperatura ambiente se efectuaron con el analito enlazado a un soporte sólido, como un papel filtro o gel de sílice. En estas aplicaciones se dispersa una solución de ana– lito sobre el sólido y se evapora el disolvente. Se mide entonces la fosforescencia de la superficie. La matriz rígida reduce al mínimo la desactivación del estado triplete por supresión mediante cho– ques. La supresión o atenuación por medio de colisiones afecta mucho más a la fosforescencia que a la fluorescencia debido al mayor tiempo de vida del estado triplete. 15 T. Vo-Dinh, Room Temperature Phosphorimetry for Chemical Analysis, New York: Wiley, 1984.