Principios de análisis instrumental

"O "' ~ e: " .S Luz dispersa 400 600 500 400 300 200 400 Ovaleno Antraceno 500 600 Longitud de onda de emisión, nm a) 500 600 700 800 Longitud de onda de excitación, nm b) FIGURA 15.6 Espectros de lu minisce ncia tota l. En a), el espectro de fluorescencia total de una mezcla de an t raceno y ova leno se ilustra como una gráfica tridimensional. En b), el espectro de fluorescen– cia total de 8-hidroxibenzo [a]pireno se presenta como una gráfica de curvas de nivel. Cada curva represe nta una intensidad particular de fluoresce ncia. (Parte a) tomada de Y. Talmi et al., Anal. Chem. , 1978, 50, p. 936A. DOI: 10.1021/ac50033a719. Fi gura 11, p. 948A. Parte b) adaptada de J. H. Rho y J . L. Stewart, Anal. Chem., 1978, 50, p. 620, DOI: 10.1021/ac50026a020. Fig ura 2, p. 622. Copyright 1978 American Chemica l Society.) Otro tipo de espectro de luminiscencia se muestra en la figura 15.6. El espectro de luminiscencia total es una representa– ción tridimensional o una gráfica con curvas de nivel. De forma simultánea, ambas muestran la señal de luminiscencia en función de las longitudes de onda de excitación y de emisión. Con fre– cuencia, dicha información recibe el nombre de matriz de excita– ción-emisión. Aunque el espectro de luminiscencia total se puede obtener mediante un instrumento computarizado normal, puede conseguirse con más rapidez mediante sistemas con detectores en serie (véase la sección siguiente). Algunos instrumentos para medir luminiscencia permiten un escaneo simultáneo tanto de las longitudes de onda de exci- >» 15A Teoría de la fluorescencia y la fosforescencia 363 4.0 3.0 Espectro ©©©© "' Tetraceno ·¡:¡ ¡j de excitación i;l ¡; o 2.0 ::l o:: " "O -¡;; '" " {/) 1.0 0.0 a) 4.0 w 3.0 "' -~ ,e u ·~ 2.0 -¡;; '" " {/) 1.0 J ~ :': 0.0 350 400 450 500 550 600 Longitud de onda, nm b) FIGURA 15.7 Espectros de fluorescencia sincromcos . En a), se muestran los espectros de excitación y emisión del tetraceno. En b), se presenta el espectro sincrónico para una diferencia de longitud de onda fija de 3 nm. (Tomada de T. Vo-Di nh, Anal. Chem ., 197 8, 50, p. 396, DOI: 10.1021/ac50025a010. Figura 1, p. 397. Copyrig ht 1978 American Chemical Society.) tación, como de las de la emisión con una pequeña diferencia de longitud de onda entre ellas. El espectro que resulta se conoce como un espectro sincrónico. Una señal de luminiscencia se obtiene solo en longitudes de onda en las que se presentan tanto la excitación, como la emisión para la diferencia de longitudes de onda que se elige, como se muestra en la figura 15.7. El espectro sincrónico también puede generarse a partir del espectro de lumi– niscencia total mediante un software apropiado. Como ya se señaló, la fotoluminiscencia ocurre usualmente a longitudes de onda más largas que las longitudes de onda de la excitación. Además, las bandas fosforescentes se encuentran en general a longitudes de onda más largas que las bandas de fluo– rescencia porque, en la mayoría de los casos, el estado triplete excitado tiene menor energía que el correspondiente estado sin– gulete. De hecho, la diferencia de longitudes de onda entre los dos proporciona una medida útil de la diferencia de energía entre los estados excitados singulete y triplete.